Birds of Prey e la fantasmagorica rinascita di Harley Quinn termina con lo scioglimento dell’impero di Roman Sionis, in seguito alla morte dello stesso criminale. Con i soldi e il diamante rinvenuti, Helena Bertinelli, Dinah Lance e Renee Montoya fondano il gruppo di vigilantes, Birds of Prey.
Dopo lunghi anni di relazione, Harley Quinn (Margot Robbie) e Joker (Jared Leto) decidono definitivamente di separarsi. Per ricominciare, una sera, l’ex psichiatra si reca nei pressi di un club di proprietà del signore del crimine Roman Sionis (Ewan McGregor), dove viene catturata in seguito a una rissa. Notando la situazione, la cantante Dinah Lance (Jurnee Smollett-Bell) accorre in suo soccorso, liberandola.
Non essendo la notizia di dominio pubblico, sulla sua separazione dal clown principe del crimine, Harley decide una sera di far saltare in aria la Ace Chemicals, il luogo che aveva dato inizio ufficialmente alla sua storia d’amore. Ad indagare sull’accaduto, vi è l’alcolizzata agente della polizia di Gotham City, Renee Montoya (Rosie Perez). Nel frattempo, il boss criminale invia il suo sadico braccio destro, Victor Zsasz (Chris Messina), a recuperare un diamante appartenente alla vecchia famiglia criminale dei Bettinelli. Ma esso viene rubato dalla borseggiatrice Cassandra Cain (Ella Jay Basco).
Catturata dalla polizia, la ladra decide di ingoiare il gioiello, prima di essere trasferita in centrale. Messo alle strette, Sionis decide di catturare la Quinn, minacciandola di ucciderla se non ritroverà il diamante. Facendo il doppio gioco, la supercriminale libera la Cain, portandola al sicuro nel suo appartamento. Ma ella viene tradita dal suo amico e padrone di casa Doc (Dana Lee), che rivela la sua ubicazione al signore della malavita.
In cambio della sua protezione, Harley decide di organizzare un incontro con Roman ad un luna park per consegnargli Cassandra. La conversazione viene ascoltata da Dinah Lance, che decide di tradire il boss, rivelandone il contenuto all’agente Montoya. Saputo del tradimento della ragazza da Zsasz, Sionis perde le staffe, e decide di intervenire in prima persona come Black Mask. Arrivati al luogo dell’appuntamento, vi è in seguito una lotta tra le donne, a cui si è aggiunta la vigilante Helena Bertinelli (Mary Elizabeth Winstead), e l’esercito di Maschera Nera.
Dopo la morte di Sionis, avvenuta per mezzo di una granata inserita all’interno della sua giacca dalla borseggiatrice, la Montoya decide di lasciare la polizia per fondare le Birds of Prey, insieme alla Lance e alla Bertinelli. Mentre Harley e Cassandra decidono di vendere il diamante, dando inizio ai loro affari.
